服务生命科学/serve life science

以下信息大致说明了选择二抗和试剂的一般步骤，在您为您的应用选择产品时，它会有所帮助！您可以在Jackson ImmunoResearch官方使用选择过滤器来最终确定您需要的产品。

一、选择产品类型

亲和纯化的二抗以三种不同形式提供，最佳选择取决于预期的应用。从 Whole IgG，F（ab’）₂片段或Fab片段抗体中选择。

抗体的完整IgG形式适用于大多数免疫检测程序。F（ab’）₂和Fab抗体可用于具有特定分析要求的实验。

抗血清尚未经过亲和纯化。

图1： IgG的消化（大约MW = 160 kDa）产生许多不同的片段。木瓜蛋白酶消化产生两个单价Fab片段和一个Fc片段，每个片段约50kDa。胃蛋白酶消化降解Fc结构域，留下具有约110kDa的MW的二价F（ab’）₂片段。

二、选择物种目标

根据一抗的宿主种类，按字母顺序列出抗体。例如，如果一抗是在小鼠中制备的，则需要“抗小鼠”二抗。

三、选择寄主种类

选择用于第二抗体的宿主物种涉及许多考虑因素，包括但不限于：

1. 宿主物种的兼容性。对于多重标记，请从相同宿主物种中选择第二抗体，以最大程度地减少第二抗体之间的相互作用。如果必须使用不同的宿主物种，则二抗必须分别与本应用中使用的其他二抗的宿主交叉吸附。
2. 交叉反应物种。一些应用需要吸附在其他物种上的第二抗体，以最大程度地减少对内源性免疫球蛋白或其他第一抗体的识别（请参阅步骤5）。选择可为预期应用提供适当交叉吸附的第二抗体宿主。
3. 个人喜好或经验。根据我们的经验，在不同宿主物种中产生的二抗之间质量几乎没有差异。据报道，与其他宿主相比，兔中产生的抗体具有更高的亲和力。
4. 与蛋白A和蛋白G的结合。兔抗体与蛋白A和蛋白G的结合很好，但是山羊和驴抗体与蛋白G的结合更好。

四、选择特异性

下列术语解释可能有助于选择最合适的实验抗体特异性。

    （1）抗性IgG

    这些抗体与IgG分子的重链和轻链均发生反应，即与IgG的Fc和F（ab’）₂ / Fab区反应（图1）。抗IgG（H + L）抗体还与其他免疫球蛋白类别（IgM，IgA，IgD，IgE）和亚类反应，因为它们都共享相同的轻链（κ或λ）。与抗碎片特异性抗体相比，抗IgG（H + L）抗体具有更广泛的表位识别能力。建议将它们用于所有常规免疫检测程序。

    （2）抗IgG 轻链特异性

    这些抗体与IgG和其他免疫球蛋白共享的轻链反应。开发它们的目的是为了在免疫沉淀（IP）后通过Western印迹方便地检测约50 kDa的蛋白质，并且不与IgG重链反应。

    （3）抗IgG 、F（ab’）₂ 片段特异性

    这些抗体与IgG 的F（ab’）₂ / Fab部分反应。它们已通过ELISA测试和/或吸附在Fc片段上。它们对IgG不是特异性的，因为它们与轻链反应，因此也与其他免疫球蛋白类别（IgA，IgM，IgD和IgE）和共享相同轻链的亚类反应。

    （4）抗骆驼IgG，VHH结构域