在学习gDNA时，经常出现的问题是“ gDNA提取的目的是什么？”
g DNA提取的目的
基因组DNA（gDNA）提取是生命科学中最普遍使用的程序之一。gDNA包含生物体的所有遗传，染色体物质，并编码生命必需的所有成分。gDNA提取的目的是将这种遗传物质与细胞的其余部分（蛋白质，RNA，细胞膜等）分开。纯化后，科学家可以研究单个基因，对整个基因组进行测序，修饰DNA片段等。
但是，所有这些下游应用都从基因组DNA纯化开始。因此，重要的是要确保您获得的是最优质的DNA。这就是为什么我们汇编了有关gDNA纯化的最佳技巧的列表。
如何从gDNA提取中获得更多
或多或少的样品
每个样品都是唯一的，并且DNA含量不同。一些样本类型（例如，肌肉组织）含有少量的DNA，而其他样本（例如，有核血液）则充满了过量的DNA。遵循上样指南是一种好习惯，因为过多的样品会导致色谱柱堵塞而影响试剂盒性能。有时少即是多！
g DNA提取的样品类型
任何gDNA提取的第一步是裂解细胞，以破坏细胞膜并释放内含物。完成裂解步骤至关重要。裂解不当会大大降低产量（因为DNA被困在细胞内）或降低纯度（因为过量的细胞碎片会渗出盐分）。为确保最佳裂解条件，请考虑您开始使用的样品类型。
细胞与生物液
- 细胞和生物体液（血液，精液，唾液，牛奶等）通常是直截了当的，需要在55°C快速消化蛋白酶K。如果样品在消化后是完全均质的，那您就应该做好了！
组织
- 由于组织是3D固体基质，因此需要更强烈的裂解程序。消化组织的最快方法是切开样品（尽可能小）以增加表面积。这为蛋白酶K提供了更多的空间来分解组织的小部分。这样做将大大加快消化时间，因此您无需隔夜孵育。
其他一切
- 无论样品是什么，Zymo Research的化学试剂都可以从甚至最困难的样品类型（如蜂蜜或粪便）中纯化DNA。
技巧-缓慢而稳定
当涉及gDNA提取时，最好的技巧之一就是以您最舒适的速度进行操作。无论是去除离心柱，放入新的收集管中还是用正确的缓冲液洗涤，处理都在DNA提取性能中发挥着重要作用。
纯洗脱液的提示
大多数结合缓冲液均含有盐。如果它们进入洗脱液，则会大大降低260/230的比例，并导致制备不纯。您可以尝试几种方法来帮助减少最终DNA洗脱液中的盐污染量。
- 确保使用适当的离心速度从色谱柱和基质中完全去除这些盐。
- 用乙醇洗涤缓冲液彻底洗涤色谱柱，以防止溅回和盐分污染。我们建议沿移液管的壁运行移液器吸头以冲洗掉所有盐。
- 如果您使用的是带帽色谱柱，请尝试在清洗步骤中倒置封闭的色谱柱，以除去可能溅到帽上的任何痕量盐。
- 请务必注意列的提示。不要让它接触任何绑定缓冲区。对于那些要特别小心的人，我们建议每次洗涤时使用新的收集管。
- 除基质外，不要让洗脱缓冲液接触色谱柱的任何部分。如果是这样，您将冒着拾起可能尚未洗掉的痕量盐的风险。
完成-在洗脱液中获得更多DNA
洗脱步骤是整个工作流程中最关键的步骤之一。在此步骤中，您将需要决定产量或浓度。更大的洗脱体积可以回收更多的DNA。但是，如果您需要非常浓缩的样品，则总的DNA产量会更低。在将洗脱缓冲液添加到色谱柱之前，请记住这一点。
将洗脱缓冲液加热到55°C有助于提高洗脱效率。
秘诀–将洗脱液重新装回到色谱柱上，以获取色谱柱上可能残留的所有DNA。然后孵育5分钟，然后旋转进行第二次洗脱。根据样品的不同，这可以使产量最多提高5％。
从生物体液和组织中回收DNA-提示
通过记住以下gDNA提取技巧，可以从生物体液和组织中回收高质量的DNA：
- 适当的样品量
- 完全裂解
- 适当的样品量
- 洗脱条件
- 减轻程序错误
提取DNA可能很困难，但是希望这些技巧可以帮助您充分利用gDNA制备物。
首次纯化
为了从任何样品中纯化高质量，超纯DNA的最简单方法，请务必尝试使用Quick- DNA Miniprep Plus试剂盒。使用试剂盒之前，请牢记这些重要建议，以确保您可以在所有下游测定中获得最佳的基因组DNA。