萃取前防止核酸降解 保持样品完整性的秘诀

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  • 2019年11月19日
  • 技术专栏
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样品采集

样品采集和保存的重要性

必须在收集时保持样品完整性,因为保存不当会影响下游纯化的质量。此外,由于核酸降解,细胞生长/衰变以及与收集物流有关的问题,未受保护的样品可能会发生成分变化和偏差。

简化的保存和纯化

为了解决这个问题,Zymo Research将样品收集,保护和核酸纯化工作流程与单一保存试剂DNA / RNA Shield TM连接在一起。DNA / RNA屏蔽TM无需冷藏(-80°C)即可稳定核酸,即使在环境温度下长达30天也能保护样品。这消除了对昂贵的存储条件和专门的样品收集程序的需求,同时即使通过多个冻融循环也可以保持DNA / RNA图谱的保留快照。该试剂极大地简化了样品收集和核酸纯化的过程。它与所有Zymo Research纯化试剂盒兼容,并且与其他防腐剂(如RNAlater®)不同,在样品处理之前无需将其去除。只需将结合试剂添加到DNA / RNA Shield TM中的样品中,然后纯化即可(图1)。

DNA / RNA防护流程
图1:简化的工作流程,从受DNA / RNA Shield TM保护的样品开始,然后由Zymo Research DNA和RNA提取试剂盒纯化。

DNA / RNA Shield TM提供多种收集容器,以最适合您的工作流程需求:血液收集管,粪便收集管,裂解管或拭子和收集管。要尝试这种简化的工作流程的样本,请确定您喜欢的样本类型,然后单击所需的试剂盒以立即申请。

防冻保护

时间,储存温度和冻融循环都会导致样品稳定性问题。但是,DNA / RNA Shield TM提供了针对这些变化的无忧保护。通过即使在环境温度下也能稳定DNA和RNA,DNA / RNA Shield TM消除了对昂贵的储存条件和专门的样品收集程序的需求。但是,在较低温度下存储的样品也可以免受冻融的不利影响(图2)。因此,样品完整性被保留为DNA / RNA的快照,无论存储条件如何,该快照都反映了从初始采集开始的原始特征。

凝胶可视化
图2:在受DNA / RNA Shield TM保护的全血样品中,总RNA谱图从冻融中稳定下来。将全血样品+/- DNA / RNA Shield™进行> 2次冻融循环。随后,使用Quick-RNA™全血试剂盒纯化总RNA,并通过TapeStation分析。

在常温下储存期间的稳定性

另外,DNA / RNA Shield TM裂解细胞,使核酸酶失活,并化学稳定核酸。例如,对从存储在DNA / RNA Shield TM中的血液中纯化的DNA和RNA的分析显示,在室温下最多保存30天,DNA或RNA水平没有变化(图3)。

RTqPCR比较DNA / RNA Shield中存储的样品
图3:DNA / RNA Shield TM在室温下随时间有效地稳定了血液样本中的DNA和RNA 。图显示了在不同时间点针对各种常见靶标从用DNA / RNA Shield TM储存的血液样本中分离的RNA提取的(RT)qPCR结果。样品一式四份运行。

样品微生物成分的维护

通过保持粪便样品的微生物组成,很容易观察到DNA / RNA Shield TM的作用。如果没有适当的稳定,则会在某些细菌无法生长的地方引入高水平的变异性和偏见,而其他细菌则不会。但是,将DNA / RNA Shield TM添加到样品中后,随着时间的流逝,微生物的特征会得以保留,并防止任何移动或偏斜(图4)。它提供了一种简单有效的方法,可在不同温度下,尽管经过冻融循环,但仍能随时间稳定DNA和RNA。

带有和不带有DNA / RNA屏蔽的微生物成分比较
图4:DNA / RNA Shield TM保存的粪便样品的微生物组成与未保护的样品的微生物组成。将粪便样品的微生物组成(用不同的颜色表示)在环境温度下随时间存储,有无DNA / RNA Shield TM保护。使用DNA Miniprep Kit提取DNA,然后进行16S rRNA靶向测序。想自己尝试一下吗?