描述
Yeast Transformation Kit II for Saccharomyces cerevisiae
酵母转化试剂盒（用于酿酒酵母）
【通知】：本试剂盒自2024/4月开始升级到第二代，在第一代试剂盒的基础上添加感受态冻存液，一改第一代试剂盒中感受态现做现用的严格要求，用户能更灵活的调整感受态制备和转化的时间，更人性化。同时，维持包装规格的基础上，维持原价格。
产品信息
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产品名称 |
产品编号 | 规格 | 价格（元） |
| Yeast Transformation Kit IIfor Saccharomyces cerevisiae | MF2501-200T | 200T |
900 |
【温馨提示】：见我司懋康生物整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。
产品描述
本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，适用菌株广泛，能用于多个质粒的共同转化。每个试剂盒可做200次质粒的转化。
本品基于第一代试剂盒做出升级，新增感受态冻存液，这样制备好的感受态不用现做现用，能置于-80℃稳定保存6-12个月。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 规格 | 储存方法 |
| MF2501-A | 1M LiAc Solution 1M醋酸锂溶液 | 10 ml | 室温保存 |
| MF2501-B | 50% PEG Solution 50%PEG溶液 | 50 ml | 室温保存 |
| MF2501-C | Carrier DNA (10mg/ml)载体DNA（10mg/ml） | 2×1ml | -20ºC保存 |
| MF2501-D | Competent Cell Storage Solution冻存液 | 10ml | 室温保存 |
保存与运输方法
保存：Carrier DNA置于-20ºC保存，其他室温保存，1年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
1） 第一次使用Carrier DNA，需要将装Carrier DNA的整个管子置于沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上，之后放在-20ºC保存。下次使用时需在冰上解冻Carrier DNA。
2） PEG溶液低温情况下会析出，使用前最好常温温育确保完全溶解才使用。
3） 酵母转化整个过程请无菌操作。
4） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、 酵母感受态细胞的制备
1.1 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线，30℃培养2-4天以活化菌种。
1.2 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3-5mm短线，30℃培养2-4天。待酵母单菌落生长至2mm时，接种。
1.3 挑取酵母单菌落接种到3ml YPDA液体培养基，30℃培养过。
1.4 第二天转接到含50ml YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.5-0.8范围。4000rpm离心5min收集细胞，去上清。
1.5 用30ml无菌去离子水重悬沉淀细胞。4000rpm离心5min，去上清。
1.6 沉淀用1.5ml的100 mM LiAc重悬（100 mM LiAc：150μl 1M LiAc+1350μl 无菌水混匀即可】，之后转移到1.5ml离心管内。4000rpm离心5min，去上清。
1.7 用1.0ml冻存液重悬沉淀，此时，即得到所需的酵母感受态细胞。按50μl（或100μl）分装到1.5-2ml无菌冻存管内，或直接转化，或进行冻存。【注意】：如果进行文库转化，按600μl/管分装。
1.8 按照缓慢冷冻的方法（二选一）：①将感受态放入程序降温盒内，再放到-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存；②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。【注意】：缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。
二、酵母质粒转化
2.1按照以下体系制备转化用混合液，每个转化反应需310μl的混合液。
| 组分 | 质粒转化混合液 |
| 1M LiAc Solution | 36 μl |
| 50% PEG Solution | 240 μl |
| Carrier DNA (10mg/ml) | 10 μl |
| 质粒（~ 200 ng/μl） | 5 μl（根据质粒的浓度加入相应的体积） |
| 总体积 | 用无菌去离子水定容到310μl |
2.2 取310μl转化混合液加入上述制备好的1管感受态细胞（50-100μl/管），用枪轻轻反复吹吸菌体，使得管底的酵母细胞充分悬浮。
2.3 置于30℃水浴锅孵育30min，每10min轻轻混匀一次。
2.4 置于42℃水浴锅热激30min，每10min轻轻混匀一次。
2.5 12000rpm离心15s，去掉上清液。
2.6 【可选步骤】用1ml YPD plus（MS6309-50ML）重新悬浮沉淀，30℃摇床震荡培养30-60min。12000rpm离心15s，去掉上清液。【注意】：转化产物使用YPD Plus复苏，转化效率可提高50-100%。若想提高现有酵母的转化效率，推荐进行此步操作。
2.7 往沉淀内加入100μl无菌去离子水，重新悬浮沉淀。并转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养2-4天。
三、酵母文库转化
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| 货号 | 名称 | 规格 |
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| MF2501-200T | Yeast Transformation Kit酵母转化试剂盒 | 200T |
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| MF2354-100UL | Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化学感受态细胞 | 100μl |
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| MF3603-20UL | pGBKT7-Lam Vector 酵母双杂交对照载体 | 20μl |
| MF3604-20UL | pGADT7-AD Vector酵母双杂交克隆载体 | 20μl |
| MF3605-20UL | pGADT7-T Vector酵母双杂交对照载体 | 20μl |
| MS6309-50ML | YPD Plus酵母扩增培养液 | 50ml |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】