描述
XL2-Blue Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
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货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
MF2325-1000UL | XL2-Blue Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl | 410 |
MF2325-5000UL | XL2-Blue Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl | 1730 |
产品组分:
组分编号 | 组分名称 | 货号(规格) | |
MF2325-1000UL | MF2325-5000UL | ||
MF2325-A | XL1-Blue Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2325-B | Control Vector puC19,10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
XL2-Blue菌株是XL1-Blue菌株的高效衍生菌,具四环素和氯霉素抗性。XL2-Blue菌株能保证高拷贝质粒的稳定复制,recA和endA的缺失,确保插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的抽提。hsdR突变保护克隆DNA不被EcoK核酸内切酶系统切割。F′附加体上lacIqZΔM15基因的存在使其可进行蓝白斑筛选。
XL2-Blue菌株基因型:endA1 supE44 thi-1 hsdR17recA1 gyrA96 relA1 lac [F ́ proABlacIqZΔM15 Tn10 (TetR) Amy CamR]
产品描述
本品是大肠杆菌XL2-Blue菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率>109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件:
保存:-80℃保存,六个月有效。
运输:干冰运输。
注意事项
- 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存,不可反复冻融且放置时间过长,否则会减低感受态细胞的转化效率。
- 最好在冰上融化感受态细胞。
- 进行转化操作时,需在相应温度及无菌条件下进行。
- 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
- 为防止转化实验不成功,可保留部分连接反应液以重新转化,将损失降到最低。
- 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl),供对照实验用。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
- 从-80℃冰箱取出取感受态细胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物),用手轻弹管底轻轻混匀,冰浴静置25min。
- 42℃水浴热激45s,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
- 向每个离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(SOC、LB或2YT),混匀后置于37℃ 摇床,200 rpm振荡培养60min,目的使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
- 低速离心收菌(比如4000rpm,2min),留取100μl左右上清,用枪轻轻吹打重悬菌块,之后加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于室温(或37℃)直至液体被吸收,之后倒置放于37℃过夜培养。
【注意】:
a)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可不用离心,直接取少量转化产物涂布平板;反之,若转化的DNA总量较少,则通过离心(4,000 rpm,2min)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b)新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
d)进行蓝白斑筛选实验,将含IPTG和X-Gal的LB固体平板置于37℃培养至少17h,从而让颜色生成。接下来再将平板置于4℃孵育2h能够加强颜色生成。
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MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade氯霉素 | 10g |
MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt氨苄青霉素钠 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧苄青霉素二钠盐 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那霉素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利福平 | 1g |
MF2001-1G | X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 | 1g |
MF2002-1G | IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 | 1g |
附表1固体和液体LB培养基配方
组分Component | LB(液体)/升 | LB(固体)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化钠NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
附表2固体和液体2-YT培养基配方
组分Component | 2YT(液体)/升 | 2YT(固体)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 16g | 16g |
酵母提取物Yeast extract | 10g | 10g |
NaCl | 5g | 5g |
1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
琼脂Agar | / | 15g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】
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