描述
Stbl4 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞
产品标签：
Stbl4；Stbl3；Stbl2；HB101；Stable；Direct repeats正向重复片段；Retroviral sequences 逆转录病毒序列；
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货号 |
产品名称 | 规格 | 价格（元） |
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MF2292-1000UL |
Stbl4 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl |
299 |
| MF2292-5000UL | Stbl4 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl |
1299 |
产品组分：
| 组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
| MF2292-1000UL | MF2292-5000UL | ||
| MF2292-A | Stbl4 Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2292-B | Control Vector puC19, 10 pg/µl | 10μl | 10μl |
菌株描述
Stbl4菌株来源于Stbl2菌株，可用于慢病毒载体或逆转录病毒载体的构建，特别适用于克隆不稳定插入片段（比如：正向重复序列，逆转录病毒序列）。为了改善性能，引入gal-突变和F’附加体，lon-复原为野生型lon+等位基因。Stbl4不仅保持Stbl2的遗传特性（维护不稳定插入片段），而且据报道还能用于复杂二级代谢物的发现、CRISPR文库构建和维护。Stbl4中的mcrA 突变和mcrBC-hsdRMS-mrr序列的删除允许甲基化基因组序列的克隆。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯质粒DNA的获得。lacZ∆M15标记使其可用于蓝/白斑筛选。此菌株具有四环素抗性。
Stbl4菌株基因型：mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal–thi-1 supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15 Tn10(TetR)]
产品描述
本品是Stbl4菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 对不稳定DNA克隆或逆转录病毒/慢病毒载体克隆，涂板后应在30℃培养，以减少错误重组的发生概率。
2） 后续进行阳性菌落的扩繁和高纯质粒的获取，推荐选用TB培养基（Terrific Broth），优于LB或SOC。
3） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
4） 最好在冰上融化感受态细胞。
5） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
6） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
7） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。
8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃取出感受态细胞迅速置于冰浴中5min使其完全融化。
2） 向融化的感受态细胞中加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹混匀（避免用移液枪上下吹打），冰浴静置25min。
3） 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。
4） 向每个离心管中加入700 μl无菌的LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养70min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
【注意】：当质粒中含不稳定片段，30℃培养能降低错误重组的概率。当转化pUC19对照，需用37℃，225rpm培养60min来复苏。】
5） 5000rpm离心1min，吸走600 μl上清，留取100μl左右吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃过夜培养17-20h，或30℃过夜培养20-24h。
【注意】：当质粒中含不稳定片段，30℃培养能降低错误重组的概率。当转化pUC19对照，需37℃过夜培养。
【注意】：a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
附表1固体和液体LB培养基配方
| 组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
| 酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
| 氯化钠NaCl | 10g | 10g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |
附表2液体TB培养基配方
| 组分Component | TB（液体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 1.2% |
| 酵母提取物Yeast extract | 2.4% |
| 甘油 | 4.0% |
| KH2PO4 | 17mM |
| K2HPO4 | 72mM |
| 配制流程（1L）：
j 配制10×磷酸缓冲液（170mMKH2PO4，720mM K2HPO4）：溶解2.31g KH2PO4和12.54g K2HPO4于90ml去离子水中，定容到100ml，高压灭菌。 k 往800ml去离子水中依次加入：12gTryptone，24gYeast extract，4ml甘油，充分溶解后，定容到900ml，高压灭菌。待溶液冷却至60℃以下，往其内加入100ml灭菌的10×磷酸盐缓冲液，混匀，即得1L完整的TB培养基。 |
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附录I几款Stbl感受态细胞的参数比较表（适用于不稳定DNA的克隆）
| 感受态名称 | Stbl2 | Stbl3 | Stbl4 |
| 产品货号 | MF2316（化转）
MF2395（电转） |
MF2317（化转）
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MF2292（化转）
MF2392（电转） |
| 推荐应用 | 克隆正向重复逆转录病毒序列和串联排列基因； | 克隆慢病毒表达载体中发现的正向重复序列； | 克隆正向重复逆转录病毒序列和串联排列基因；
基因组文库构建（电转）； |
| 来源菌株 | E. coli JM109/J5 | E. coli HB101 | Stbl2/E. coli JM109/J5 |
| 转化效率 | >109 cfu/μg DNA（化转）
>1010 cfu/μg DNA（电转） |
>108 cfu/μg DNA（化转）
>1010 cfu/μg DNA（电转） |
>108 cfu/μg DNA（化转）
>5×109 cfu/μg DNA（电转） |
| 改善质粒质量 | 是（endA1） | 否 | 是（endA1） |
| 含F´附加体（用于制备ssDNA） | 否 | 否 | 是 |
| 克隆甲基化DNA | 是（mcrB, mrr） | 是（mcrB, mrr） | 是（mcrB, mrr） |
| 克隆不稳定DNA | 是（recA1） | 是（recA13） | 是（recA1） |
| 减少重组 | 是（recA1） | 是（recA13） | 是（recA1） |
| 兼容质粒大小 | 可能用于质粒>20 kb | 可能用于质粒>20 kb | 可能用于质粒>100 kb |
| 蓝白班筛选 | 否 | 否 | 是（lacZΔM15） |
| 抗生素耐性菌 | 否 | 是（链霉素） | 是（四环素） |
| T1噬菌体抗性（tonA） | 否 | 否 | 否 |
| 制备非甲基化DNA | 否 | 否 | 否 |
附录II几款Stbl感受态细胞的基因型（适用于不稳定DNA的克隆）
| 菌株名称 | 基因型（Genotype） |
| Stbl2 | F–mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1 λ– Δ(lac-proAB) |
| Stbl3 | F–mcrB mrr hsdS20(rB–, mB–) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5 λ–leu mtl-1 |
| Stbl4 | mcrA Δ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 gyrA96 gal–thi-1 supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15 Tn10(TetR)] |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】