描述
Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
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| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| MF2495-1000UL | Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞 | 10×100μl | 436 |
| MF2495-5000UL | Lemo21(DE3) Chemically Competent Cell 化学感受态细胞 | 50×100μl | 1836 |
产品组分：
| 组分编号 | 组分名称 | 货号（规格） | |
| MF2495--1000UL | MF2495–5000UL | ||
| MF2495-A | Lemo21(DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2495-B | Control Vector puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
Lemo21(DE3)菌株是一种T7菌株，特别构建专门开发适用于困难蛋白的原核表达，包括：膜蛋白、毒性蛋白，以及具溶解性问题的蛋白。
Lemo21(DE3)不仅含BL21（DE3）的宿主特性，而且能对困难克隆进行可调控表达。这一可调控表达通过改变溶菌酶（lysY）水平来实现，溶菌酶是T7 RNA聚合酶的天然抑制剂。溶菌酶的水平（0-2,000µM）通过在表达培养物中添加L-鼠李糖来调节。当 Lemo21（DE3）在不含鼠李糖的情况下生长时，该菌株的表现与含 pLysS 的菌株相同。然而，添加鼠李糖即可调节目的蛋白的表达。对于难溶蛋白，调节表达水平有可能产生更可溶的正确折叠的蛋白。Lemo21(DE3)能同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，适用于PET，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。
菌株重要特征：
1） Lon 和 OmpT 蛋白酶缺失，减少对重组蛋白的降解；
2） fhuA2突变，赋予菌株产生噬菌体T1抗性；
3） pLemo质粒（具氯霉素抗性）携带由鼠李糖诱导的T7溶菌酶表达框，实现目的蛋白的可调控表达；
Lemo21(DE3)菌株基因型：fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ∆hsdS / pLemo(CamR)
产品描述
本品是大肠杆菌Lemo21(DE3)菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2） 最好在冰上融化感受态细胞。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 转化高浓度质粒或高效率连接产物可相应降低最终用于涂板的菌量。
5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
7） 诱导时，IPTG浓度可选：0.1~2 mM。鼠李糖最佳浓度，诱导时间，温度，IPTG浓度需自行优化。
8） 对毒性大的蛋白，在转化感受态涂平板这一步应加入鼠李糖（1000 µM），以促进阳性菌落的形成，并且后面的所有步骤都应在培养基中加入鼠李糖。
9） Lemo21(DE3)菌株携带pLemo质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
10） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作流程【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃冰箱取出感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。
2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3） 向每个离心管中加700 μl无菌的LB或2YT培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的LB或2YT固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若预计的克隆较多，可直接吸取转化产物涂布平板；若预计的克隆较少，则同上离心（5,000 rpm，1min）后留取适量培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
c）Lemo21(DE3)菌株携带 pLemo质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应同时加入34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
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| 货号 | 名称 | 规格 |
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| MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade 氯霉素 | 10g |
| MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt 氨苄青霉素钠 | 10g |
| MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧苄青霉素二钠盐 | 5g |
| MS0019-10G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那霉素 | 10g |
| MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade 利福平 | 1g |
| MF2002-100G | IPTG 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 | 100g |
附表1 固体和液体LB培养基配方
| 组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
| 胰蛋白胨 Tryptone | 10g | 10g |
| 酵母提取物 Yeast extract | 5g | 5g |
| 氯化钠 NaCl | 10g | 10g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂 Agar | / | 15g |
附表2 固体和液体2-YT培养基配方
| 组分Component | 2YT（液体）/升 | 2YT（固体）/升 |
| 胰蛋白胨 Tryptone | 16g | 16g |
| 酵母提取物 Yeast extract | 10g | 10g |
| NaCl | 5g | 5g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂 Agar | / | 15g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】