描述
His-Spin蛋白微量制备
亮点
快速：在不到5分钟的时间内从细胞裂解物中纯化带有His标签的蛋白。
简单：使用旋转柱为小规模研究制备纯蛋白。
方便：台式台式离心机无需其他特殊仪器。
描述
His-Spin蛋白Miniprep为基于His标记的蛋白提供了一种基于快速旋转柱的纯化技术。最多可在5分钟内纯化1 mg带有His标记的蛋白，并在低至100 µl的His-Elution洗脱液中洗脱。纯化的蛋白质是超纯的，可直接用于酶法测定，蛋白质生化分析，SDS-PAGE和其他敏感应用。直接的旋转，洗涤和洗脱步骤极大地简化了蛋白质的纯化过程，使最终用户可以在数分钟而不是数小时内获得结果。
技术指标
亲和矩阵 镍带琼脂糖
装订能力 1毫克
洗脱方法 咪唑梯度
洗脱体积 100-200 µl（最佳150 µl）
技术原理 基于带镍的His-Affinity Gel（IMAC）。
处理时间 5分钟
产品储存 请将His-Affinity Gel，His-Binding Buffer，His-Wash Buffer和His-Elution Buffer储存在4°C下。其他成分可以在室温下保存。
蛋白质纯度 电泳纯。纯化的高质量蛋白质适用于酶动力学，蛋白质生化分析，SDS-PAGE和其他应用。
所需设备 微量离心机
样品类型 含有His标记蛋白的细胞裂解物或其他复杂蛋白混合物。
产品常见问题
Q1：该产品是否适合真核表达系统（HEK细胞）？
是的，His-Spin蛋白Miniprep试剂盒也可以与真核表达系统一起使用。参考资料：Marcos J. Caballero-L´opez，Manuel Nieto-D´ıaz，Monicaonica，David Reigada，Teresa Mu〜noz-Galdeano，Angela del´Aguila，Rosa Navarro-Ru´ız，Wolgang Pita- Thomas，Dan Lindholm，Rodrigo M. Maza-XIAP与FAF1相互作用并调节其活性– 2017，BBA-分子细胞研究。doi：10.1016 / j.bbamcr.2017.04.006
Q2：洗脱步骤是否可以使用少于100 µl的His-Elution缓冲液？
较小的洗脱体积是可能的，并且可能产生更多的浓缩蛋白质，但是洗脱效率可能会受到影响。
问题3：什么会降低蛋白质产量？
-由于蛋白质折叠，His标签可能无法进入。蛋白质可以在变性条件下纯化。-重组蛋白可能由于过表达而变得不溶。蛋白质可以在变性条件下纯化。-原料太稀。如果起始原料中含有极少量的His-tagged蛋白，则可能需要超过300 µl的样品量才能纯化出足够的蛋白。只需重复步骤3和4，直到所需的体积已加载到色谱柱上即可。-该蛋白质与His-Affinity Gel的结合太紧密，无法用随附的His-Elution Buffer洗脱。包含500 mM咪唑或100 mM EDTA的定制洗脱缓冲液可能会洗脱紧密结合的蛋白质。-根据蛋白质，
Q4：哪些化学药品/试剂与试剂盒不兼容？
EDTA，EGTA，DTT，> 15 mM的巯基乙醇和> 10 mM的咪唑或组氨酸。如果您的起始原料包含这些化合物，则用His-Binding Buffer稀释可能会有所帮助。要装载足够的物料，必须在色谱柱上进行多次装载。如果样品在不同的缓冲液中，请调节pH值，咪唑和盐浓度并进行测试准备。如果蛋白质仍未结合，则在使用前需要对样品进行透析。
问题5：您如何纯化不溶性蛋白质？
-优化表达条件。蛋白质的过表达可能导致细胞内不溶性包涵体的形成。如果在整个细胞的SDS-PAGE电泳后可见大条过量表达的蛋白，但在清除细胞裂解液的SDS-PAGE电泳后条带不存在，则表明该蛋白可能不溶，表达的蛋白可能形成包涵体。-使用变性条件。不溶的蛋白质将无法使用提供的缓冲液进行纯化。但是，可以在变性条件下，在≤8 M尿素或≤6 M盐酸胍的情况下纯化此类蛋白质。在这种条件下，蛋白质的天然结构以及因此的酶活性会丢失，但是可以通过纯化后重新折叠蛋白质来恢复。
Q6：该试剂盒可用于纯化膜蛋白吗？
膜蛋白可以在非离子去污剂中溶解后纯化。加载的样品中可能存在高达2％的Triton®或TWEEN®浓度。
问题7：试剂盒应使用哪个pH？
加载样品的pH值应在7.5和8.0之间。pH值太高或太低都会导致蛋白质产量和/或品质下降。
问题8：如何改善蛋白质质量/纯度？
-检查缓冲液是否有污染迹象，并检查缓冲液的pH值。-增加离心时间和速度。确保每次旋转后，His-Affinity Gel完全排干（某些较旧的离心机型号可能需要更长的离心时间）。-如果问题仍然存在，则可以在纯化方案中添加其他洗涤步骤，或将洗涤缓冲液中的咪唑浓度提高至60 – 100 mM（例如，通过用His-Elution缓冲液稀释）。
Q9：有推荐的裂解方案吗？
有推荐的裂解方案吗？为了从大肠杆菌裂解物中纯化蛋白质：1.收获并沉淀10毫升大肠杆菌培养物。2.重悬于1 ml的His-Binding缓冲液中。3.通过超声处理（或其他方法）裂解细胞。4. 在4°C下以≥12,000 xg旋转5分钟。5.将150 µl的上清液用于His-Spin蛋白Miniprep方案。
Q10：哪些化学药品/试剂盒兼容？
还原剂≤15 mMβ-巯基乙醇非离子型洗涤剂≤2％Nonidet®P-40≤2％Triton®X-100≤2％Tween®-20变性试剂≤8 M尿素化学品和其他试剂≤10 mM咪唑≤ 10 mM组氨酸