描述
Frozen-CC Yeast Transformation Kit for Saccharomyces cerevisiae
酵母转化试剂盒（用于酿酒酵母）
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
价格（元） |
| Frozen-CC Yeast Transformation Kit for Saccharomyces cerevisiae
酵母转化试剂盒（用于酿酒酵母） |
MF2503-200T | 200T |
1700 |
【温馨提示】：见我司懋康生物整理的酵母双杂交（Yeast two-hybrid assay）产品专题。
产品描述
本酵母转化试剂盒（Yeast Transformation Kit）是基于高效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法来制备和转化酵母菌感受态细胞的一款试剂盒，操作简单快捷，能用于多个质粒的共同转化。本试剂盒提供了完整的酵母感受态制备、储存以及转化试剂，每个试剂盒可做200次质粒的转化。
产品组分
|
组分编号 |
组分名称 | 规格 |
|
MF2503-A |
Preparation Solution 制备液 | 100ml |
| MF2503-B | Storage Solution 冻存液 |
10ml |
| MF2503-C | Transformation Solution 转化液 |
70ml |
保存与运输方法
保存：4ºC保存，1年有效。
运输：冰袋运输。
注意事项
- 酵母转化整个过程请无菌操作。
- 使用高纯的质粒有助于提高转化效率。
- 本品适用于酿酒酵母的转化。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、酵母感受态细胞的制备
-
- 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固体培养基上划线，30℃培养2-4天以活化菌种。
- 挑取酵母单菌落在YPDA固体培养基上划3-5mm短线，30℃培养2-4天。待酵母单菌落生长至2mm时，接种。
- 挑取酵母单菌落接种到3ml YPDA液体培养基，30℃培养过夜。
- 第二天转接到含30-50ml YPDA液体培养基的三角瓶中继续培养，直至OD600达到0.4-0.5范围。1000g离心5min收集细胞，去上清。
- 用30-50ml无菌去离子水重悬沉淀细胞。1000g离心5min，去上清。
【注意】：若想节省准备时间，也可直接使用一周内的酵母培养产物（4℃保存），取3ml接种到50mlYPDA液体培养基过夜摇菌。之后离心收集细胞，用于下游实验。
- 用10ml制备液重悬和洗涤沉淀，1000g离心5min，去上清。
- 用0.5-1.0ml冻存液重悬沉淀，此时，即得到所需的酵母感受态细胞。按50μl分装到1.5-2ml无菌冻存管内，或直接转化，或进行冻存。
- 按照缓慢冷冻的方法：①将感受态放入程序降温盒内，再放到-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存；②将感受态用多层纸包好放入泡沫盒内，再放于-80℃冰箱过夜，之后取出置于-80℃保存。感受态至少6个月稳定。
【注意】：缓慢冻存是保存冻存后感受态细胞转化效率的关键步骤。
二、酵母转化
2.1 按照以下体系制备转化用混合液，每个转化反应需360μl的混合液。
|
转化液 |
350 μl |
|
质粒（~ 200 ng/μl） |
5-10 μl（根据质粒的浓度加入相应的体积） |
| 总体积 |
用无菌去离子水定容到360μl |
-
- 取360μl转化混合液加入上述制备好的感受态细胞，用枪轻轻反复吹吸菌体，使得管底的酵母细胞充分悬浮。
- 置于30℃水浴锅孵育40-60min，每10min轻轻混匀一次。对于一些菌种，延长孵育时间能提高转化效率，控制在3h之内。
- 3000g离心3min，去掉上清液。
- 【推荐】用0.5ml YPD Plus（MS6309-50ML）重悬沉淀，30℃摇床振荡培养30-60min。1000g离心5min，去掉上清液。
- 往沉淀内加入400μl无菌去离子水，重新悬浮沉淀。稀释10倍、100倍后分别转移到相应的酵母培养平板上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，30℃培养3-5天直至出现酵母克隆。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】