描述
FD NeuroApop™ 试剂盒是根据原位DNA缺口末端标记（TUNEL）技术原理专门设计用于检测中枢神经系统组织切片中神经元凋亡的方法。该测定法使用末端脱氧核苷酸转移酶催化将生物素化的脱氧尿苷掺入DNA片段的游离3′-羟基末端，这被认为是细胞凋亡2、3的最特征之一。整合的生物素通过抗生物素蛋白-生物素复合物（ABC）方法进行扩增和可视化，从而可以进行光学显微镜鉴定。
FD NeuroApop™试剂盒的试剂和程序经过优化，可在检测背景最低的凋亡神经元时实现高度的特异性和敏感性。该试剂盒可用于冷冻 切片和石蜡切片以及培养的细胞（请参阅下面的照片样本）。该套件的过程大约需要4个小时。
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用FD NeuroApop ™ 试剂盒检测凋亡神经元。从小鼠胚胎的背神经节切下石蜡切片（10μm）（E17）。切片用FD NeuroApop™试剂盒处理，并用甲基绿复染。部分由Drs。迈克尔·沃格尔（Michael Vogel）和丽莎·丘（Lisa Qiu）。 |
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使用FD NeuroApop ™ 试剂盒检测凋亡神经元。 从小鼠胚胎的下丘（E17）切下石蜡切片（10µm）。切片用FD NeuroApop™试剂盒处理，并用甲基绿复染。部分由Drs。迈克尔·沃格尔（Michael Vogel）和丽莎·丘（Lisa Qiu）。 |
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中风大鼠模型中凋亡神经元的检测。 从中风模型的大鼠纹状体上切下20 µm低温恒温器切片。用FD NeuroApop™试剂盒对该切片进行处理以检测神经元凋亡，然后用FD甲基绿复染。 |
套件内容：
第一部分 （储存在-20°C下）
- 消化酶2毫升x 4
- 反应液A 2 ml x 2
- 反应液B 85 µl
- 反应溶液C 60 µl
- 色原液20毫升
第二部分 （在4°C下储存）
- 平衡缓冲液20毫升
- 检测试剂5毫升
- 10倍磷酸盐缓冲盐水250毫升x 2
所需材料但不包括在内：
- 双蒸馏水
- 加湿室
- 保温箱或水浴箱（30°C）
- 组织学用品和设备，包括显微镜载玻片，玻璃盖玻片，染色罐，细尖镊子，乙醇，二甲苯或二甲苯替代物，固定介质和光学显微镜。
References:
- Gavrieli Y, Sherman Y, and Ben-Sasson SA. (1992) Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation. J. Cell Biol. 119:493-501.
- Wyllie AH. (1980) Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation. Nature. 284:555-6.
- Arends MJ, Morris RG, and Wyllie AH. (1990) Apoptosis: the role of the endonuclease. Amer. J. Pathol. 136:593-608.
- Hsu SM, Raine L, and Fanger H. (1981) Use of avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques: a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures. J. Histochem. Cytochem. 29:577-80.