描述
EPI300 Chemically Competent Cell
大肠杆菌化学感受态细胞
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| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） |
| MF2297-1000UL | EPI300 Chemically Competent Cell大肠杆菌化学感受态细胞 | 10×100μl | 429 |
| MF2297-5000UL | EPI300 Chemically Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞 | 50×100μl | 1799 |
产品组分：
| 组分编号 | 组分名 | 货号（规格） | |
| MF2297-1000UL | MF2297-5000UL | ||
| MF2297-A | EPI300Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
| MF2297-B | Control Vector puC19,10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
EPI300菌株有一个突变的trfA基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有ori V复制子的质粒的高拷贝扩繁，诱导液（CopyCutter Induction Solution）可以诱导trfA基因的表达。当含有ori V复制子质粒的EPI300细胞在LB/2YT或SOB培养基中生长时，trfA基因的表达被抑制，ori V复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入诱导液（CopyCutter Induction Solution），ori V复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此EPI300菌株可以降低ori V复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。
【更多特征】：
[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型，使EPI300适合于甲基化DNA的有效克隆；
endA1的突变确保质粒克隆的高产量；recA1的突变确保大分子DNA插入的稳定性；
lacZΔM15标记的存在，使EPI300适用于蓝白斑筛选；
rpsL赋予EPI300链霉素抗性。
EPI300菌株基因型：F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr
产品描述
本品是大肠杆菌EPI300菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒检测转化效率＞3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。
保存与运输条件：
保存：-80℃保存，六个月有效。
运输：干冰运输。
注意事项
1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。
2） 最好在冰上融化感受态细胞。
3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。
4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到最低。
6） 产品包装内含载体pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。
7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】
1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吸打），冰浴静置25min。
2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。
3） 向每个离心管中加700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含所选质粒筛选抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养过夜。如果进行蓝白斑筛选，37℃培养至少15h。
【注意】：
a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆较少，可通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。
b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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| MF2014-5ML | CopyCutter Induction Solution诱导液 | 5ml |
附表1固体和液体LB培养基配方
| 组分Component | LB（液体）/升 | LB（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
| 酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
| 氯化钠NaCl | 10g | 10g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |
附表2固体和液体2-YT培养基配方
| 组分Component | 2YT（液体）/升 | 2YT（固体）/升 |
| 胰蛋白胨Tryptone | 16g | 16g |
| 酵母提取物Yeast extract | 10g | 10g |
| NaCl | 5g | 5g |
| 1N NaOH | 调整pH至7.0 | 调整pH至7.0 |
| 琼脂Agar | / | 15g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】