描述
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 | 规格 |
价格（元） |
| EMSA PAGE凝胶配制试剂盒 | MF5451-25T | 25T |
450 |
产品描述
凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。
本试剂盒包括 EMSA PAGE 凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷。
产品组分
| 组分编号 | 组分名称 | 组分规格 | 保存方法 |
| MF5451-A | 30% Acr/Bis | 100ml | 4℃避光 |
| MF5451-B | PAGE胶配制缓冲液 | 50ml | 4℃ |
| MF5451-C | 50% 甘油 | 30ml | 室温 |
| MF5451-D | PAGE胶凝固剂 | 0.5g | 室温 |
| MF5451-E | PAGE胶促凝剂 | 0.4ml | 室温避光 |
保存与运输方法
保存：4℃~室温避光保存，各组分保存详见瓶子标签。1年稳定。
运输：室温运输。
注意事项
1） PAGE胶凝固剂配制成10%溶液后，应分装成小份-20℃保存，通常6个月有效。同时尽量减少室温存放时间，使用完立即放回冰箱，防止失效。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用另一份-20℃保存的10%溶液。
2） 配制PAGE胶的过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
3） 在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水速度不能过快。
4） 30% Acr-Bis具轻微神经毒性，请小心操作，并且注意有效防护以避免直接接触人体。
5） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
操作步骤
1） 配制10% PAGE胶凝固溶液：使用前请将0.5g PAGE胶凝固剂用5ml蒸馏水充分溶解，配制成10% PAGE胶凝固剂溶液，将溶液分装置于-20℃保存，通常半年有效。频繁使用可置于4℃保存，通常2周有效。
2） 根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，凝胶浓度配制方法参考下表（表1）。
| 表1配制不同浓度的EMSA PAGE分离胶 | |||||||
| 分离胶浓度 | 凝胶体积（ml） | 所需各组分体积（单位：ml） | |||||
| 蒸馏水 | 30% Acr-Bis | 凝胶配制缓冲液 | 50% 甘油 | 10% PAGE胶凝固溶液 | PAGE胶促凝剂 | ||
| 4% | 6 | 4.3 | 0.8 | 0.6 | 0.3 | 0.03 | 0.006 |
| 4.5% | 6 | 4.2 | 0.9 | 0.6 | 0.3 | 0.03 | 0.006 |
| 5% | 6 | 4.1 | 1.0 | 0.6 | 0.3 | 0.03 | 0.006 |
| 6% | 6 | 3.9 | 1.2 | 0.6 | 0.3 | 0.03 | 0.006 |
| 6.5% | 6 | 3.8 | 1.3 | 0.6 | 0.3 | 0.03 | 0.006 |
凝胶配制：
- a)将不同体积的蒸馏水、30%acr、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。
- b)加入10% PAGE胶凝固溶液和PAGE胶促凝剂，立即涡旋混匀 5-10s，以使溶液充分混匀。
- c)在凝胶模具中迅速灌入适量凝胶溶液。
- d)将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
- e)静置，等凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
- f)进行电泳操作。
3） 电泳
将电泳槽放入4℃或冰水浴中，加入电泳缓冲液，按照 10V/cm的电压预电泳60min，将样品加入点样孔后 按照 10V/cm的电压电泳。确保胶的温度不超过 30°C，在电泳槽外加上冰块进行降温。电泳至 EMSA/Gel-Shift上样缓冲液中的蓝色染料溴酚蓝至胶的下缘 1/4 处，停止电泳。
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| 货号 | 名称 | 规格 |
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】