描述
用4％琼脂糖珠制备琼脂糖结合的赤藓菌（Erythrina cristagalli）凝集素。 Erythrina cristagalli lectin由大约28 kDa和26 kDa的两个不同的亚基组成。ECL所结合的碳水化合物结构经常在哺乳动物来源的膜和血清糖蛋白中发现。特征
- 基质是热稳定的，交联的4％琼脂糖小珠，分子溶出度约为2×10 7道尔顿
- 磁珠直径范围为45-165微米
- 基质在pH 3-11的溶液以及许多有机溶剂中均稳定
- 使用亲和纯化的凝集素制备固定化的凝集素
- 共价连接可保留凝集素活性并最大程度减少可能导致非特异性或疏水相互作用的构象变化
- 将亲水性间隔臂插入凝集素和基质之间
- Tris或其他常规使用的缓冲液不会将结合的蛋白质从微珠中浸出
- 共轭后无残留电荷。这样可以最大程度地减少与基质的非特异性结合
- 产品以1：1悬浮液的形式提供在缓冲液中
- 抑制/洗脱糖：200 mM乳糖或糖蛋白洗脱溶液（ES-1100）
技术指标
| 单位大小 | 2毫升 |
|---|---|
| 应用领域 | 糖生物学，亲和色谱 |
| 推荐的存储 | 2-8°C请勿冻结 |
| 解 | 的10mM HEPES，pH 7.5中，0.15M的NaCl，0.1mM的氯化钙2，20mM的乳糖，0.08％叠氮化钠 |
| 推荐用法 | 使用前，用缓冲液彻底清洗凝胶，以除去添加的稳定凝集素的糖。洗脱与该琼脂糖凝集素结合的糖缀合物的推荐产品：糖蛋白洗脱液，目录 第ES-2100号。或者，可以使用0.2 M乳糖。使用后，用数倍柱体积的缓冲盐水洗涤凝胶，然后将凝胶重悬在含有0.08％叠氮化钠的缓冲盐水中进行保存。 |
| 矩阵共轭 | 凝集素 |
| 糖特异性 | 半乳糖，N-乙酰半乳糖，乳糖 |
| 共轭 | 琼脂糖 |
技术信息
在该结构上的唾液酸取代似乎阻止了凝集素结合。这种特异性为利用琼脂糖结合的ECL分离或分离哺乳动物糖蛋白提供了机会。据报道该凝集素可用于通过负选择淘选技术（协议可根据要求或在我们的网站上获得）分离人自然杀伤（NK）细胞。人NK细胞似乎缺乏结合ECL所需的可及的表面碳水化合物结构，并且与其他单核细胞不同，它们不粘附于ECL包被的培养皿。由于此过程涉及负选择淘选技术，因此可以获得高回收率的存活NK细胞。贴壁细胞也可以通过在半乳糖或乳糖中孵育来回收。使用我们的亲和纯化的凝集素可制备琼脂糖结合*的刺桐（Erythrina cristagalli）凝集素。具有约2×10 7道尔顿的分子量排除极限的热稳定的交联的4％琼脂糖珠粒用作凝集素共价偶联的固相基质。严格控制凝集素在珠子上的附着，以保持凝集素的活性并使结合的凝集素的构象变化最小化，这可能导致非特异性离子或疏水相互作用。我们开发的将凝集素与琼脂糖珠偶联的技术在凝集素和基质之间插入了亲水性间隔臂。* 3 mg凝集素/ ml凝胶与传统的溴化氰步骤相比，这种偶联方法具有以下优点：
- 保留了偶联凝集素的最大碳水化合物结合活性
- 链接在一定的pH值范围内是稳定的
- Tris或其他常规使用的缓冲液不会将结合的蛋白质从微珠中浸出
- 共轭后不存在残余电荷。这使与基质的非特异性结合最小化。
我们的琼脂糖结合凝集素以每毫升沉降珠恒定浓度的凝集素提供。选择每种凝集素的浓度以达到珠中存在的每毫克凝集素的最高糖缀合物结合能力。使用已知结合凝集素的糖蛋白测试每批次的结合能力。这为用户提供了指南，并确保了我们的琼脂糖结合凝集素的质量。
