描述
7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC)
硫化氢荧光探针
产品标签
7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC) ；7-氨基-4-甲基香豆素（AMC）；WSP-1 (Washington State Probe-1)；WSP-5；硫化氢（H2S）特异性探针；PAG (DL-propargylglicine) 硫化氢合成抑制剂；Hypotaurine H2S清除剂；CAS NO：95633-27-5；
产品信息
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产品名称 |
产品编号 | CAS NO. | 规格 | 价格（元） |
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7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC)硫化氢荧光探针 |
MX5303-1MG | 95633-27-5 | 1mg |
683 |
| 7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC) 硫化氢荧光探针 | MX5303-5MG | 95633-27-5 | 5mg |
1583 |
产品描述
7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC)是一种用于硫化氢（H2S）检测的香豆素荧光探针。在含H2S的体系内，该化合物上的芳香叠氮功能基团被还原生成7-氨基-4-甲基香豆素（AMC），伴随着在λex = 365 nm和λem = 450 nm处的荧光增强。AzMC既可用于体外监测H2S的酶促生成，也可用于观察活细胞中的H2S。AzMC对H2S具高度的灵敏度和选择性，体外AzMC（10μM）可用于200nM-100μM范围内的H2S检测。在含mM浓度的半胱氨酸、同型半胱氨酸、谷胱甘肽和多种其他常见的生物分析物的存在下选择性地与H2S进行反应。AzMC可用作鉴定新型胱硫醚β合成酶（CBS）抑制剂和激活剂的一款工具。AzMC可用于监测PLP依赖的酶活性（比如：胱硫醚β合成酶（CBS）、胱硫醚γ-裂解酶（CSE）、色氨酸合酶（TS））。适用于高通量筛选。
产品特性
CAS NO：95633-27-5
化学名：7-azido-4-methyl-2H-1-benzopyran-2-one
分子式：C10H7N3O2
分子量：2
外观：白色至黄色固体
纯度：≥95%
溶解性：溶于DMSO
化学结构式：
保存与运输方法
保存：-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。
运输：冰袋运输。
使用方法
- 储存液制备
将低温保存的产品从冰箱取出，置于室温回温至少20min。低速离心3-5min。之后往瓶内加入适量无水DMSO充分溶解配成10mM储存液（比如，1mg AzMC（Mw: 201.2）加入497μl DMSO）。按照单次用量分装避光冻存，避免反复冻融，至少3个月稳定。
- 工作浓度
正式实验前，取10mM储存液用适当缓冲液或培养基稀释到所需工作浓度即可。具体的工作浓度请参考文献或根据自身实验需求来进行优化调整。参考下方一些实验数据，来自公开文献，仅作参考。
应用示例1：使用AzMC来测定体外重组人CBS催化H2S生成水平。96孔板中，酶反应缓冲液体积为180μl，包含：200 mM Tris-HCl pH 8.0, 5 µM吡哆醛-5-磷酸酯（PLP），10 mM谷胱甘肽和0.5 mg/ml BSA。AOAA或 YD0171加入10μl。CBS（5 µg/孔）按照10μl体积加。AzMC（10 µM）和CBS底物L-半胱氨酸和高半胱氨酸（终浓度2.5mM）按照10μl体积加，最终总的反应体系是200μl。37℃孵育1h，之后测定450nm下的荧光值（λex = 365 nm）。【文献来源：Chao, C., Zatarain, J.R., Ding, Y. et al. Cystathionine-β-Synthase Inhibition for Colon Cancer: Enhancement of the Efficacy of Aminooxyacetic Acid via the Prodrug Approach. Mol Med 22, 361–379 (2016). 】
应用示例2：使用AzMC测定猪气管上皮细胞的胞内H2S生成。气管组织圆片（6.9mm直径）用锋利的不锈钢打孔器制备，之后放到缓冲液中（含20 µM AzMC）。在圆周振荡器上室温避光孵育1h，之后转移到96孔板（7.0mm孔径），并加入100µl相同的反应缓冲液覆盖组织。于荧光酶标仪测定荧光值（激发和发射波长分别是365nm和450nm）。【文献来源：Krause NC, Kutsche HS, Santangelo F, DeLeon ER, Dittrich NP, Olson KR, Althaus M. Hydrogen sulfide contributes to hypoxic inhibition of airway transepithelial sodium absorption. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2016 Sep 1;311(3):R607-17. Epub 2016 Jul 20. PMID: 27440715.】
应用示例3：使用AzMC来测定RAECs细胞中的H2S生成。RAECs 细胞用50μM AzMC（PBS）孵育30min，之后用PBS清洗3次。之后在荧光显微镜下观察H2S与AzMC反应后产生的荧光信号。
Fig 1. H2S content and the level of CSE were decreased under hyperglycaemia and hyperlipidaemia states. (A) RAECs were treated with 40 mM glucose, 200 μM palmitate, 100 μM NaHS and 2 μM Mito-Tempo for 48 hrs, and the H2S level were detected. The fluorescence of H2S was observed by fluorescence microscope, and the nuclei were pointed out by the arrow. (n = 4, **P < 0.01 versus control group. ##P < 0.01 versus HG+Pal group). (B) The CSE level of RAECs was tested by Western blotting. (n > 5, *P < 0.05 versus control group, #P < 0.05 versus HG+Pal group).
注意事项
- 整个染色过程中需注意避光。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归集奇生物/MKBio懋康所有】
