7-AAD Cell Cycle Analysis Kit细胞周期检测试剂盒

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SKU: MX3236-200T 分类: 标签: ,

描述

7-AAD Cell Cycle Analysis Kit细胞周期检测试剂盒


产品信息

产品名称

产品编号 规格 价格(元)

7-AAD Cell Cycle Analysis Kit

细胞周期检测试剂盒

MX3236-50T 50T 700
MX3236-100T 100T

1120

MX3236-200T 200T

1720

产品描述

7-AAD细胞周期检测试剂盒(7-AAD Cell Cycle Analysis Kit)是一款采用7-AAD染色法进行细胞周期检测的试剂盒,通过流式细胞仪进行分析。本试剂盒通常用于贴壁细胞或悬浮细胞的细胞周期检测。对于组织样品,需经消化成单细胞后才可用此试剂盒进行检测。

7-氨基放线菌素D(7-Aminoactinomycin D,7-AAD)是一种不具有膜渗透性的DNA结合染料(选择性插入DNA的GC富集区),通常被活细胞排除在外。活细胞和早期凋亡细胞排斥7-AAD不被染色,但具损伤质膜或受损/无代谢活动的细胞无法阻挡染料进入而被染色。7-AAD/DNA复合物能被488nm的氩离子激发器,发生大的斯托克斯迁移,最大发射波长在647nm。细胞经7-AAD染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么,含双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度介于1-2(见附图I)。

产品组成

组分编号 组分名称 保存方法 产品编号(规格)
MX3236-50T MX3236-100T MX3236-200T
MX3236-A 染色缓冲液 +4℃ 5ml 10ml 20ml
MX3236-B 7-AAD染色液(25×) +4℃避光 0.2ml 0.4ml 0.8ml
MX3236-C RNase A(50×) -20℃ 0.1ml 0.2ml 0.4ml

保存与运输方法

保存:染色缓冲液+4℃保存,7-AAD染色液+4℃避光保存,RNase A-20℃保存,一年有效。

运输:冰袋运输。

注意事项

1) 因7-AAD也能结合RNA,因此,试剂盒内提供RNase A用来降解RNA,以降低背景荧光。然而,虽有资料显示,7-AAD不和RNA结合,但从我司的实验数据来看,添加RNase处理的效果更好。

2) 因7-AAD不具有细胞膜渗透性,则需先对细胞进行乙醇固定,再进行后续染色。

3) 请自行准备95%乙醇和PBS。

4) 荧光染料均存在荧光淬灭,保存和使用过程中请注意避光,以减缓淬灭。

5) 因7-AAD对人体有刺激性,请注意适当防护。

6) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

一、 染色步骤

1.1 细胞样品的准备:每个样品的细胞数量可以为500万以上。

a)对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一干净离心管内备用。用胰酶消化细胞,直至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm离心3-5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果无法完全离心至管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清,可以残留约50µl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 冰浴预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。再次加入1ml冰浴预冷的PBS,重悬细胞。

b)对于悬浮细胞:1000rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞,如果无法完全离心至管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清,可以残留约50µl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入1ml 冰浴预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5ml离心管内。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50µl左右的PBS,以避免吸走细胞。再次加入1ml冰浴预冷的PBS,重悬细胞。

c)对于组织样本:用剪刀将组织剪成尽量小的小块后,用0.25%胰酶消化30-60min(或根据实际情况选择适当的混合酶来进行组织消化),经过200-400目细胞筛网过滤得到单细胞悬液。然后参照步骤b)对于悬浮细胞来准备样品。

1.2 细胞固定:取4ml冰浴预冷的95%乙醇,一边低速涡旋震荡的同时逐滴加入1ml细胞悬液(冰上操作),混匀后于4℃固定2h或更长时间,固定12~24h可能效果更佳。1500rpm离心5min沉淀细胞。对于特定的细胞,如果无法完全离心至管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心速度。小心吸除上清,可以残留约50µl左右的乙醇固定液,以避免吸走细胞。加入约5ml冰浴预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约50µl左右的PBS,以避免吸走细胞。轻轻弹动离心管底以分散细胞避免细胞成团。

1.3 7-AAD染色工作液的配制:参照下表根据实际检测样本的数量配制足量的7-AAD染色工作液【注意:7-AAD染色工作液短时间可4℃保存,但需当日使用】

1个样品 5个样品 10个样品
染色缓冲液 0.1ml 0.5ml 1.0ml
7-AAD染色液(25×) 4μl 20μl 40μl
RNase A(50×) 2μl 10μl 20μl

1.4 染色:每管细胞样品中加入0.1ml 7-AAD染色工作液,缓慢并充分重悬细胞沉淀,37℃避光孵育30min。随后可置于4℃或冰浴避光存放。

1.5 加入2ml PBS,1500rpm离心5min,去上清。

1.6 加入500μl PBS,流式细胞仪上机检测。【请在24h内完成流式检测,最好能在当天完成流式检测。】

1.7 流式检测与分析:用流式细胞仪在激发波长488nm处检测红色荧光(7-AAD通道或PerCP通道),同时检测光散射情况。采用适当分析软件进行DNA含量和光散射分析。

【注意】:上机时,荧光通道设置为线性放大(Linear Scale);k数据分析,去除粘连细胞。

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附图I.典型的7-AAD细胞周期示例图(参考用)

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归集麒生物/MKBio懋康所有】

其他信息

重量 50 克
品牌:

懋康MKBio

CAS:

N/A

规格:

200T

货期:

1-2天