细菌转化是分子生物学中最常用的技术之一。该过程将外源DNA（例如质粒，基因缺失盒等）转移到宿主细胞中。一旦进入细胞，就可以将DNA整合到基因组中，进行复制，用于生产蛋白质等。但是，转化可能是一个效率低下的过程，需要采取一些方法上的技巧才能将DNA移过细菌膜和细胞壁，并使细菌“有能力”吸收DNA。
什么是能力？
许多细菌物种可以自然地从环境中吸收DNA。但是，不是最常见的经过遗传转化的实验室细菌，即大肠杆菌。
为了克服缺乏天然能力的问题，可以通过多种方法处理大肠杆菌以使其能够吸收DNA。通常，研究人员使用化学（和热激）或电穿孔方法进行转化，尽管存在其他方法。产生感受态细胞的过程会将孔引入细胞膜，从而使它们更容易摄取细胞外DNA。一旦这些能力方法完成，大肠杆菌细胞就可以进行DNA转化了。
什么是转换效率？
转化效率通常用于描述感受态细胞吸收DNA的能力。该值描述为对于给定量的感受态细胞，通过转化1 µg质粒DNA产生的菌落形成单位（cfu）的数量。例如，理想的效率应为10 8 cfu / µg DNA。
转化效率受多种因素影响，包括靶细胞的基因型，质粒大小，超螺旋与松弛DNA，收集时细胞的生长阶段以及转化方法。考虑到各种潜在的混淆因素，必须特别注意确保成功进行转化实验。
制作感受态细胞
最典型地，感受态细胞用于分子克隆工作流程，蛋白质表达以及使用质粒DNA的各种应用中。但是，根据转化方法，制备大肠杆菌感受态细胞可能很繁琐，需要极纯净的水，指定的高压灭菌玻璃器皿和高级试剂，甚至需要专用设备（电穿孔仪）。有许多可用的协议详细介绍了制备感受态细胞所需的过程和缓冲液。甚至还提供带有预制缓冲器的套件，以加快此过程。面对这些挑战，下面的列表可以帮助您避免制造合格细胞时出现的问题。
制作化学感受态细胞：
- 保持冷！由于需要使细胞保持低温，因此制备感受态细胞的过程具有挑战性。这是至关重要的，因为当细胞变得合格时，它们是如此的敏感和脆弱。保持低温有助于避免细胞在加工过程中死亡。这意味着如果可能，请使用冷藏室并在0 – 4°C下进行离心。也应使用预冷却的微量离心管和架子，并在使用前保持在干冰上。这样做可以使细胞更快地冻结，这一点尤其重要，尤其是在等分细胞时。
在培养过程中，保持细胞凉爽甚至很重要。较低的温度增长（18 – 33°C）可提高转换效率。因此，我们建议使用ZymoBroth，因为即使在较低温度下也可以促进有效生长。
- 准备冷冻室感受态细胞需要储存在-80°C。使细胞变得合格的过程使它们非常脆弱-可能破裂并死亡。这意味着在-20°C下储存会大大阻碍转化效率。在-20°C下仅存储24小时后，细胞可能损失多达90％的转化效率。
- 开始之前准备试剂和实验室用具要培养感受态细胞可能是一个漫长而乏味的过程，需要进行多次长时间的培养。该过程需要使用无菌生长培养基，玻璃器皿和加工试剂。这要求在开始操作之前准备所有试剂和实验室用具。
获得感受态细胞的最简单方法
制造感受态细胞的另一种选择是使用可商购的菌株。这消除了与此耗时的过程相关的许多麻烦，并确保了最佳的转换效率，因为它已经过测量和验证。快速高效转换的最佳选择是Mix and Go！感受态细胞。它们具有非常高的转化效率，每μg质粒DNA 最多具有10 9个转化体，并且绕过了常规的热激过程，可在20秒内完成转化（对于基于氨苄青霉素抗性的质粒）。
感受态细胞是实验室中最常用的试剂之一，拥有正确的细胞对于任何成功的转化都至关重要。
无论您选择购买还是制造合格的感受态细胞，Zymo Research的技术支持团队都会为您提供帮助。
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